شرايط كار بايد كاملاً استريل و در كنار شعله باشد. از نمونه‌هاي ليشمانيايي كه مي‌خواهيم تكثير كنيم يك قطره روي لام گذاشته و تحرك آنها با عدسي شيئي ۴۰ بررسي مي‌شود. لازم است به محيط RPMI، FCS بيافزاييم تا غني شود.اگر رشد و تحرك انگل خوب بوده باشد مي‌توان آن را ۱۰ تا ۲۰ برابر كشت انبوه داد. يعني به ازاي 10cc محيط كشت مي‌توان ۱ تا ۲ سي سي انگل به محيط افزود. اين محيط را روي روتاتور در اتوكلاو 25c نگهداري مي‌كنيم. اگر بخواهيم از اين محيط به موش تزريق كنيم لازم است كه ۵ روز در اين حالت بماند و بعد از اين ۵ روز انگل بيشترين پاتوژنيسيتي را خواهد داشت.